放线菌素d处理v79细胞的条件培养液对旁观者细胞p53mrna和蛋白表达及细胞周期的影响
Keywords: 放线菌素d,条件培养液,p53,细胞周期
Abstract:
？目的：观察放线菌素d(actinomycind，actd)处理v79靶细胞获得的条件培养液(conditionedmedium，cm)对v79旁观者细胞p53mrna和蛋白表达及细胞周期的影响，以研究actd诱导旁观者效应发生的可能机制。方法：4.0mg/lactd处理v79靶细胞1h，pbs洗3次，加入新鲜培养液后开始计时，分别在第4、8、12和24h获取靶细胞不同时段的cm。用不同时段cm培养正常v79细胞24h后，分别采用rt-pcr检测旁观者细胞中p53的mrna水平；免疫组化法检测p53蛋白的表达；流式细胞术测定旁观者细胞的细胞周期分布。结果：与对照组比较，p53mrna水平在4、8和24hcm处理组均增加(p<0.01)，在4~12hcm时段，p53mrna水平随着时段的延后呈逐渐降低趋势，12h组降至最低，与阴性对照的水平接近(p>0.05)。各cm处理组p53蛋白平均灰度值和积分光密度，除12hcm组外均较对照组显著增加(p<0.05)。随着时段的延后(4~12h)，p53蛋白表达逐渐减少，12h组降至最低，与阴性对照间的差异无统计学意义(p>0.05)，p53蛋白表达与p53mrna表达结果一致。不同时段cm处理组旁观者细胞g0/g1期比阴性对照组增多(p<0.05)，4hcm组增加最明显；各cm处理组s期细胞均较阴性对照组减少(p<0.01)，但组间差异无统计学意义(p>0.05)；而g2/m期细胞在4hcm组下降明显，与阴性对照间的差异有统计学意义(p<0.01)；8~12h逐渐增加，12h组接近对照水平(p>0.05)；24h又下降，与阴性对照间的差异有统计学意义(p<0.01)。结论：actd诱导旁观者效应可能是通过靶细胞的cm影响旁观者细胞p53mrna和蛋白的表达，并影响细胞周期的进展而引起的，以4hcm诱导的效应最强。
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