p53蛋白及其突变体对rhoe基因转录调控的影响

？目的：探索p53蛋白及其突变体对rhoe基因转录调控的影响。方法：构建pegfp-wt-p53质粒，利用基因定点突变pcr技术构建p53单点和双点突变体质粒，构建pgl3-rhoe-promotor-luc质粒。以p21基因的启动子序列(p21-promoter-luc)为阳性对照，egfp-n1空载体为阴性对照，将野生型和突变型p53质粒瞬时转染pc3(p53-null)细胞，利用双荧光素酶报告基因和westernblot方法检测p53蛋白及其突变体蛋白在转录水平和蛋白水平对rhoe基因表达的影响。结果：电泳及测序表明以上质粒均构建成功。双荧光素酶报告基因检测显示野生型p53蛋白可调控rhoe基因转录，但其突变体丧失对rhoe的转录调控作用(p0.05)。westernblot结果与基因转录结果一致。结论：rhoe是受p53蛋白调控的基因之一，而p53突变体失去了在转录水平调控rhoe表达的作用。