野葛异黄酮合酶基因的分离与功能验证

？异黄酮是野葛(puerarialobata)中的主要活性成分,而异黄酮合酶(ifs)是催化异黄酮生物合成的第一步关键酶,尽管野葛的ifs基因已被分离,但其功能还未得到任何验证。本研究以中国安徽省郎溪县的野葛为材料,利用rt-pcr技术成功克隆到野葛ifs基因,命名为plifs,plifs开放阅读框大小为1566bp,编码521个氨基酸,将该基因克隆到gal1启动子控制下的酵母表达载体pesc-trp上,得到重组质粒pesc-trp-plifs,通过liac/ssdna/peg方法将其转化进酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)wat11中进行异源表达,并在酵母体内对其活性进行验证,结果显示plifs能催化甘草素生成大豆苷元,表现出异黄酮合酶活性特征。荧光定量pcr分析显示,plifs基因主要在野葛的根中表达,这与活性物质异黄酮主要在野葛根中的积累模式一致。