松材线虫pcr标准化阳性对照构建及检测体系的建立

摘要建立了松材线虫pcr检测标准化阳性对照及特异性强的pcr检测体系.根据松材线虫rdna？its区和bxpe12基因的特异基因序列设计引物，并从中筛选出一对特异引物cqubs01/cquba01，该引物能从松材线虫特异性扩增出196bp片段，而不能对其他种类线虫进行扩增.基于优化pcr反应体系和反应程序，稳定的检测体系得以建立，检测灵敏度为100pg/μl.以松材线虫基因组dna为模板，以上述特异引物进行pcr扩增，将纯化后的pcr产物与pmd18？t载体连接之后转入大肠杆菌中，筛选出阳性克隆进行测序验证，最终获得了松材线虫的无害化阳性对照，建立了松材线虫标准化阳性对照的pcr检测体系.对来自于不同地区的12批次近100个样品进行了实际检测验证，其结果与实际发生情况一致，说明本检测体系稳定可靠.图3表2参8