木薯醇腈酶cdna的克隆及其在甲醇酵母中的初步表达

摘要α？醇腈酶(α？hydroxynitrilelyase,hnl)作为一种生物催化剂，能可逆地催化hcn和醛或酮类化合物反应生成手性氰醇化合物或手性药物.运用rt-pcr从木薯幼叶组织中扩增出hnl全长cdna序列,将其克隆至质粒pbluescriptsk中进行序列分析.结果表明:克隆的cdna片段和文献报道的4个木薯hnlcdna相比，核苷酸同源性最高为99.1%，氨基酸同源性最高为98.8%.利用pcr将其再克隆到酵母表达质粒ppic3.5k上，通过原生质体转化、发酵等一系列步骤，首次在甲醇酵母（pichiapastoris）中表达了木薯hnlcdna.每升发酵液可获得5040个单位的hnl.图4参13