新生sd大鼠心肌干细胞的体外分离培养与鉴定

目的自新生大鼠心脏中分离得到心肌干细胞,体外培养并观察其向心肌细胞分化的能力。方法无菌操作取下新生鼠心脏,经反复消化后,弃去消化液,所得残余组织块进行培养,视生长情况进行传代。传代细胞采用诱导分化培养液进行培养,细胞生长至镜下可见搏动细胞时,分别对原代细胞和传代细胞进行流式细胞鉴定及免疫组化染色。结果从消化后残留心肌组织块中成功培养出原代细胞,经流式细胞仪鉴定其表型为c-kit、cd31阳性,cd34、cd45阴性,心肌钙蛋白t(ctnt)阴性。细胞经传代培养两周后,单个细胞开始出现搏动,亦可见成团细胞的同步收缩。再次流式鉴定,表型有所改变,主要是cd31转阴性,ctnt阳性,而c-kit、cd34、cd45无明显变化。免疫组化再次证实,原代细胞并不表达心肌细胞结构蛋白ctnt,而在部分传代细胞内可见ctnt表达。结论成功自心脏中分离得到一类表型为c-kit+cd31+cd34-cd45-ctnt-的细胞,经使用不同成分培养液传代培养,可分化为可搏动的心肌细胞,并表达心肌结构蛋白。