momps-linker-flaa融合基因原核表达载体的构建及诱导表达

目的在嗜肺军团菌主要外膜蛋白s基因(momps)和鞭毛亚单位蛋白基因(flaa)基因间加入一段柔性链接头(linker),以构建momps-linker-flaa融合表达载体,并使其在大肠杆菌中表达。方法以嗜肺军团菌1型dna为模板,pcr分别扩增获得嗜肺军团菌momps基因和flaa基因,与带有硫氧还蛋白(trx)基因的高效原核表达质粒pet32a(+)定向重组,构建含momps-linker-flaa基因的重组质粒pet-lpslf,经限制性核酸内切酶酶切鉴定、pcr和核酸序列分析后,以iptg诱导表达trx-momps-linker-flaa融合蛋白,用sds-page及westernblotting进行鉴定。结果限制性核酸内切酶酶切鉴定、pcr和核酸序列分析表明,我们扩增出了嗜肺军团菌906bp的momps及1440bp的flaa基因,成功构建了重组质粒pet-lpslf,sds-page及westernblot分析显示重组质粒pet-lpslf在原核系统中得到了表达。结论嗜肺军团菌momps-linker-flaa基因在大肠杆菌中得到了表达,为进一步从分子水平研究其免疫原性、免疫保护性及其在临床诊断上的应用价值提供研究基础。