小鼠vegfr2胞外1-4igg样结构域的原核表达、纯化及活性鉴定

目的获得小鼠血管内皮生长因子ⅱ型受体（mvegfr2）胞外1-4igg样结构域融合蛋白并验证其免疫原性及生物活性。方法利用rt-pcr法从孕龄14d的balb/c小鼠胚胎组织中扩增mvegfr2d1-4基因，测序正确后将其克隆至原核表达载体pet-42a，构建重组质粒pet-42a-mvegfr2d1-4。将其转化至大肠杆菌bl21（de3）中iptg诱导表达，经sds-page分析，目的蛋白用westernblotting鉴定后，亲和层析法纯化融合蛋白，elisa法检测纯化蛋白的抗原活性，并通过体外细胞培养检测该融合蛋白对血管内皮生长因子（vegf）促人脐静脉内皮细胞（huvec）增殖的阻断作用。结果测序结果证实成功扩增出目的基因mvegfr2d1-4；酶切和测序结果证实pet-42a-mvegfr2d1-4原核表达载体构建成功；转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白；westernblotting证实纯化的蛋白能与特异性抗体发生反应；elisa检测显示纯化后的mvegfr2d1-4融合蛋白具有免疫原性，并且体外细胞培养试验证实其能阻断vegf对huvec的促增殖作用。结论成功获得mvegfr2d1-4/gst融合蛋白，该蛋白具有良好的免疫原性及生物活性，为进一步研究以vegfr2为靶点的抗肿瘤主动免疫治疗奠定了基础。