应用限制性显示技术筛选k562细胞脱核前后差异表达基因

目的应用限制性显示(rd)pcr技术筛选细胞松弛素b(cytochalasinb,cb)诱导k562细胞脱核前后的差异基因,探讨cb诱导细胞脱核的分子机制。方法用cb(终浓度为10μg／ml)处理k562细胞24h,分别提取对照组和处理组细胞总rna,将两组等量的细胞总rna纯化为mrna,反转录为cdna,利用rd-pcr技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、筛选cb处理前后差异表达的基因。对筛选出的差异表达基因进行克隆、测序,在genbank检索进行序列同源性分析。结果筛选及克隆了7个差异表达基因,其中水通道蛋白1(aqp1)基因经反转录pcr验证在cb诱导脱核的k562细胞中表达上调。结论aqp1基因在cb诱导k562细胞脱核过程中特异性高表达,提示其可能与细胞脱核及增殖抑制密切相关。?更多还原