cxcr4特异性拮抗剂sdf-1p2g54的构建及活性评价

摘要：目的对sdf-1进行遗传改造，将其第2位氨基酸由脯氨酸（p）突变为甘氨酸（g），且缺失其c-端α螺旋结构，以获得一种cxcr4特异性拮抗剂sdf-1p2g54。方法将pcr扩增的sdf-1突变体sdf-1p2g54的基因插入表达载体pet-30a(+)，并转化bl21(de3)菌株。iptg诱导表达的重组蛋白sdf-1p2g54在变性条件下采用镍柱亲和层析纯化，并通过梯度稀释和超滤方法得以复性。利用趋化实验鉴定sdf-1p2g54对jurkat细胞的趋化活性及对sdf-1趋化活性的抑制效应，流式细胞仪检测sdf-1p2g54诱导molt4细胞钙内流及细胞表面cxcr4内在化的能力。结果sdf-1p2g54完全丧失激活cxcr4、趋化jurkat细胞跨膜迁移和诱导molt4细胞钙内流的能力，却保持了与cxcr4的高亲和性，能有效抑制野生型sdf-1对jurkat的趋化效应、诱导molt4细胞表面cxcr4的快速内在化。结论sdf-1p2g54是一种新型的cxcr4特异性拮抗剂，具有开发成抑制hiv-1感染和癌细胞转移等重大疾病特效药物的潜在应用价值。