人cd96基因胞外区的原核表达及抗血清制备

摘要：目的原核表达并纯化人cd96胞外区蛋白，免疫家兔制备抗体。方法构建pet32-cd96重组质粒，转化大肠埃希菌bl21(de3)，以iptg诱导表达，ni2+-nta树脂纯化蛋白并免疫家兔，以间接elisa检测抗体效价，westernblot鉴定抗体特异性。结果质粒pet32-cd96经测序鉴定，通过sds电泳显示能在bl21(de3)中高效表达，相对分子质量约37000；westernblot实验结果显示制备的多克隆抗体可与hl-60细胞提取蛋白及原核表达的人cd96蛋白胞外区特异性结合。结论成功构建并表达人cd96胞外区蛋白，免疫家兔获得高滴度抗血清，为后续研究奠定了基础。