山羊β-酪蛋白基因调控区的克隆及启动子活性的检测

为了克隆山羊β-酪蛋白基因的调控区并检测5′调控区的启动子活性,利用longpcr技术对西农莎能奶山羊β-酪蛋白基因(csn2)5′和3′调控区进行了克隆(5′调控区分两段进行克隆,3′调控区进行直接克隆)、测序,将克隆的5′调控区的两个片段通过共有的单一性酶切位点hindⅲ融合成一个长为6.7kb的片段,用其替代表达载体pegfp-c1上原来的启动子cmv,指导报告基因绿色荧光蛋白(gfp)在山羊乳腺上皮细胞中的瞬时表达。结果表明,克隆的gc3.3、gc4.3、gc6.63个片段与genbank中登录的山羊csn2基因相应序列相比,同源性均为99%,其包含了tatabox、gcisland、caatbox、sar、ap1、oct-1、sm、glyco、pu-1、cac等复合元件和转录翻译调节因子的作用位点,并且5′调控区可以有效指导报告基因的表达,从而初步验证了所克隆的山羊csn2基因5′调控区的有效性,表明克隆的调控区可用于乳腺生物反应器的研究。