猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白全基因的克隆与序列分析

采用rt-pcr和重组pcr扩增猪传染性胃肠炎病毒(transmissiblegastroenteritisvirusofswine,tgev)tsx毒株纤突蛋白(spikeprotein,s)基因全长cdna序列,分离纯化pcr产物,连接到pgem-t载体,转化大肠杆菌dh5α,筛选阳性克隆pgem-s,并对其进行酶切鉴定和测序,对测序结果及推导氨基酸序列进行同源性分析。结果表明,s基因全长为4350bp(genbank登录号dq001167),编码1449个氨基酸,n端前16个氨基酸为推测的信号肽序列,其后1433个氨基酸构成成熟蛋白;与genbank中已发表的9个tgev毒株s基因进行比较,核苷酸序列同源性为95%～98%,推导的氨基酸序列同源性为95%～98%。基于s基因及其推导氨基酸序列的聚类分析表明,tsx株与miller、t014、ts和hn2002株亲缘关系较近。s基因变异是由于碱基突变造成10处氨基酸发生改变,但主要抗原部位未发生任何变异,为进一步研制猪传染性胃肠炎基因疫苗提供了良好的候选基因。