葡糖醋杆菌高静水压诱变株aflp体系的建立

【目的】从dna分子水平研究葡糖醋杆菌及其经高静水压诱变后所得突变株的差异，优化建立了适合葡糖醋杆菌的aflp技术体系，为细菌纤维素产生菌的高静水压诱变育种提供技术支撑。【方法】以1株从自制醋中分离出来的细菌纤维素产生菌j-2及其经高静水压诱变后得到的高产细菌纤维素的突变株m438为材料，对选择性扩增程序的影响因素进行分析，优化建立葡糖醋杆菌的aflp酶切体系，并对适合葡糖醋杆菌高压诱变前后差异分析的引物组合进行筛选。【结果】酶切模板dna用量600ng，酶切时间8h，过夜连接(反应时间大于10h)，预扩增产物最适稀释倍数为500倍，从24对aflp选择性扩增引物组合中筛选出了e-t/m-g为适合葡糖醋杆菌高静水压诱变前后差异分析的引物组合。供试2株菌的选择性扩增差异位点只有1处，经测序扩增片段长度为213bp，提交genbank比对，其与gluconacetobacterhanseniiatcc23769gxy0064基因组序列中24917～24723bp片段相似度为99%。【结论】所建立的aflp反应体系，适合葡糖醋杆菌j-2及其突变株m438的aflp分析。