产谷氨酰胺转胺酶菌株的高通量筛选

【目的】用醋酸纤维素膜和96孔板2种方法高通量筛选高产谷氨酰胺转胺酶(mtg)的茂原轮枝链霉菌菌株。【方法】利用紫外诱变获得茂原轮枝链霉菌突变体库后，分别利用醋酸纤维素膜和96孔板2种方法高通量初筛产mtg菌株，然后依次用试管和摇瓶发酵法复筛，并对96孔板高通量筛选方法的条件进行了优化。【结果】利用醋酸纤维素膜显色法从3000株紫外诱变的菌株中筛选出1株高产mtg茂原轮枝链霉菌，其mtg活性为4.9u/ml，较出发株(mtg活性2.7u/ml)提高了80%。优化的96孔板高通量筛选方法为：直径为3mm左右的单菌落接种至150μl发酵培养基中，30℃200r/min培养72h；利用该法从3415株紫外诱变的菌株中筛选获得了2株mtg高产株，其mtg活性为5.4u/ml，较出发株(mtg活性为3.0u/ml)提高了80%。【结论】利用基于醋酸纤维素膜和96孔板的2种高通量筛选方法分别筛选到1株和2株高产mtg的茂原轮枝链霉菌；相较传统的选育方法，这2种高通量筛选方法都大大降低了经济成本，提高了筛选效率，缩短了选育周期。