猪传染性胃肠炎病毒荧光定量rt-pcr检测方法的建立

【目的】建立一种能检测猪传染性胃肠炎病毒（tgev）含量的荧光定量rt-pcr方法，为猪传染性胃肠炎（tge）的诊断和防治提供技术支持。【方法】根据tgevth98株的n基因序列设计1对特异性引物，扩增出目的片段，连接克隆载体后构建质粒标准品；对荧光定量的循环条件进行优化，建立猪传染性胃肠炎病毒荧光定量rt-pcr检测方法，对其重复性、特异性进行检测，并与普通pcr检测方法进行比较，最后应用该方法对采自陕西杨凌周边的30份临床样品进行检测。【结果】成功构建了质粒标准品，建立了检测猪传染性胃肠炎病毒的荧光定量rt-pcr方法，该方法特异性高、重复性好、敏感性比普通pcr检测方法高2个数量级，对质粒标准品的线性检测范围为1.0×107～1.0×101拷贝/μl。用建立的检测方法对从陕西杨凌周边猪场采集的30份样品进行检测，检出4份阳性，与普通pcr检测方法符合率为100%。【结论】建立的tgev荧光定量rt-pcr方法敏感性高、特异性好、省时省力，可以对猪传染性胃肠炎病毒进行快速检测。