杜仲fls基因的克隆及原核表达

【目的】克隆杜仲黄酮醇合成酶基因（fls）全长，对其开放阅读框（orf）进行原核表达分析。【方法】以杜仲叶片为材料提取总rna，采用反转录聚合酶链式反应（rt-pcr）和cdna末端快速扩增（race）技术克隆杜仲fls基因；fls基因的orf经限制性内切酶酶切，构建其原核表达载体pet-28a-fls；最后利用iptg诱导fls基因在大肠杆菌bl21（de3）中表达。【结果】获得了黄酮醇合成酶基因全长序列，长度为1220bp，orf为1011bp，编码336个氨基酸；成功构建了原核表达载体pet-28a-fls；利用iptg诱导fls在bl21（de3）中表达，sds-page电泳结果显示，在约44ku处有特异性的蛋白条带出现。【结论】获得了杜仲fls基因的全长和orf，并成功对其进行了原核表达。