酵母端粒酶rna的制备及其构型影响因素分析

【目的】体外转录并纯化酵母端粒酶rna，明确缓冲液中组分对其构型的影响，初步研究四膜虫端粒酶相关蛋白p65与酵母端粒酶rna的结合情况，为酵母端粒酶活性鉴定及构型功能研究奠定基础。【方法】利用核酶的自剪切功能，通过在3′端引入hdv核酶序列获得完整的酵母端粒酶rna；并用分子筛superdex-200/16/60凝胶过滤纯化酵母端粒酶rna；琼脂糖凝胶电泳检测rnabuffer组分中nacl和mgcl2浓度对酵母端粒酶rna构型的影响；非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（page）检测四膜虫端粒酶相关蛋白p65与酵母端粒酶rna的结合情况。【结果】通过基因序列合成，结合pcr扩增方法获得了酵母端粒酶rna基因，并将其构建到体外转录载体上；体外转录获得大量的酵母端粒酶rna（yeast-rna-239）；使用superdex-200/16/60成功分离得到了纯净的yeast-rna-239。nacl、mgcl2浓度对酵母端粒酶rna构型有一定的影响，表现为没有nacl或mgcl2时，rna的构型均一且致密；随nacl、mgcl2浓度的增大，rna构型逐渐变得松散；而四膜虫端粒酶相关蛋白p65能与酵母端粒酶rna有效结合。【结论】在体外成功制备了高纯度的酵母端粒酶rna，nacl、mgcl2浓度对其构型有影响，四膜虫端粒酶相关蛋白p65能够帮助端粒酶rna正确折叠。