利用转基因番茄表达人成纤维细胞生长因子21(fgf21)

【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21（fibroblastgrowthfactor-21，fgf21），为利用植物反应器规模化生产fgf21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因（pmi）作为转基因植物的选择标记，将人源fgf21基因克隆至表达载体pcambia1390rⅱ（简写为p1390rⅱ）上，构建重组表达质粒p1390rⅱmfgf21。采用冻融法将质粒p1390rⅱmfgf21转入根瘤农杆菌eha105，叶盘法转化番茄(lycopersiconesculentum)“中蔬6号”，采用pcr检测、southern杂交筛选转基因番茄阳性植株，并对fgf21蛋白在转基因番茄叶片中的表达进行了westernblot分析。【结果】成功构建了带pmi安全选择标记基因的植物双元表达载体p1390rⅱmfgf21，在番茄中初步建立了以pmi为选择标记基因的遗传转化体系，共获得了26株转基因番茄植株，其中5株为阳性克隆，转化率为19.2%。采用pcr扩增和southernblot分析进行检测，结果表明，重组fgf21基因已整合到转基因番茄基因组中。westernblot分析检测结果显示，fgf21蛋白在转基因番茄叶片中有一定水平的表达，并具有良好的抗原性。【结论】获得了以pmi为选择标记成功表达fgf21蛋白的转基因番茄遗传体系。