丹参c4h基因pet32a原核表达载体的构建

【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因（smc4h）的核心区，并构建smc4h基因的原核表达载体。【方法】设计合成smc4h基因全长引物,应用pcr克隆smc4h基因的编码区并添加酶切位点，应用ecorⅴ、notⅰ双酶切smc4h-pgm-t后与原核表达载体pet32a连接，转化到大肠杆菌bl21(de3)中进行双酶切鉴定，诱导表达重组蛋白并进行sds-page电泳以及westernblot分析。【结果】克隆得到了1200bp大小的基因片段，经测序鉴定其为smc4h基因片段；连接表达载体测序结果表明，smc4h-pet32a构建成功，其诱导表达蛋白经sds-page检测及westernblot分析发现，重组蛋白表达效果较好，且主要以包涵体形式存在。【结论】成功构建了smc4h-pet32a原核表达载体，并成功诱导了smc4h-pet32a重组蛋白的表达。