一种自制的rna分离试剂及其在鱼组织总rna提取中的应用

【目的】尝试自制一种价格低廉的rna分离试剂，并检验其应用效果。【方法】以商业化的trizolreagent为对照，使用自制rna分离试剂提取草鱼皮肤组织总rna，采用分光光度计法、变性琼脂糖凝胶电泳法和rt-pcr检测其品质，并用提取的总rna合成草鱼皮肤cdna。同时使用自制rna分离试剂提取斑马鱼总rna，通过rt-pcr进行e2f5基因全长（1092bp）的克隆，构建其真核和酵母表达载体并测序。【结果】使用自制rna分离试剂提取草鱼皮肤组织总rna的品质与用trizolreagent提取的总rna品质相当，用之成功地合成了草鱼皮肤cdna。使用自制rna分离试剂提取得到了更高品质的斑马鱼总rna，用之成功地克隆了斑马鱼e2f5基因，构建了其真核表达载体pcdna3.1-flag-zfe2f5和酵母表达载体pgadgh-zfe2f5。【结论】自制rna分离试剂能够用于鱼类组织总rna的提取，提取的总rna能满足后续cdna合成及rt-pcr克隆特定基因的需要。