gdnf和lif对小鼠精原干细胞体外增殖的影响

【目的】探讨胶质细胞源性神经营养因子（gdnf）和白血病抑制因子（lif）对小鼠精原干细胞（sscs）体外增殖的影响，为后续sscs的诱导分化、转基因动物生产、基因治疗等研究奠定基础。【方法】收集6～8日龄小鼠睾丸，采用机械法和2步酶消化法获得细胞悬液。通过多次差异贴壁法分离纯化sscs和支持细胞，采用碱性磷酸酶（ap）染色和rt-pcr检测ngn3和oct4基因2种方法对sscs进行鉴定。采用单独添加gdnf（添加量为0，10，20，40ng/ml）或lif（添加量为0，500，1000，1500u/ml）的无血清dmem/f12培养基培养sscs，于培养第3，5，7天取样，同时用添加gdnf和lif（各因子单独添加量两两组合）的无血清dmem/f12培养基培养sscs，于培养第3，4，5天取样，采用甲基噻唑基四唑（mtt）法检测gdnf、lif对sscs体外增殖的单因子效应和配伍效应。【结果】与对照组相比，不论培养时间如何，单独添加20和40ng/ml的gdnf可以显著促进sscs增殖(p＜0.05)，而单独添加不同量lif对sscs增殖的影响不显著(p＞0.05)；同时添加20ng/mlgdnf和1000u/mllif可以显著促进sscs的增殖，在该条件下当精原干细胞接种密度为(6×104)～(10×104)ml-1，共培养5d时，其od490值为0.696。【结论】dmem/f12培养基中单独添加20ng/mlgdnf或同时添加20ng/mlgdnf和1000u/mllif可以显著促进小鼠sscs的体外增殖。