草鱼抗病毒基因mx全长cdna的克隆、序列分析与真核表达载体构建

mx蛋白是一类由i型干扰素（ifn）诱导表达的抗病毒蛋白。以polyi∶c诱导的草鱼（ctenopharyngodonindellus）肾细胞（cikcells）为材料，抽提细胞总rna，通过rtpcr的方法扩增出〖wtbx〗mx〖wtbz〗基因cdna全序列，连接至pmd20t载体上，构建重组质粒pmd20tmx，并测序进行序列分析。用限制性内切酶从克隆的重组质粒pmd20tmx上切下mx基因，插入到质粒pegfpc1中，构建真核表达载体pegfpc1-mx。结果显示，该基因cdna全序列为1921bp，阅读框共编码627个氨基酸，分子量约为71.1ku，理论等电点pi为8.33，其编码的mx蛋白具有脊椎动物mx蛋白共有的结构特征：一个三联体gtp结合区域和一个发动蛋白家族的典型结构特征序列。生物信息学分析表明，草鱼mx基因所编码的蛋白质以亲水区域为主，具有丰富的b细胞抗原位点，但无明显的核定位序列，空间结构包括n端的gtp酶结构域（gtpasedomain）、中间的中央相互作用结构域（centralinteractivedomain，cid）和c端的gtp酶效应结构域（gtpaseeffectordomain，ged）。同源性分析显示，草鱼mx蛋白氨基酸序列和其他物种的相似性为45.1%〖kg-*4〗～99.7%。此外还成功构建了含草鱼mx基因cdna全序列的真核表达载体pegfp-c1-mx。