大口黑鲈胰岛素基因cdna全序列的克隆及其编码蛋白的结构分析

胰岛素在鱼体内是一种重要的内分泌激素，其主要的生理功能是调控鱼体的代谢和血糖稳定。用rtpcr和cdna末端快速扩增法（race）技术克隆了大口黑鲈（micropterussalmoides）胰岛素基因cdna全序列，并对其编码的氨基酸序列和蛋白结构进行了分析。结果显示，该基因cdna序列全长665bp，其中包括5′端非翻译区101bp、3′端非翻译区213bp和开放阅读框351bp。该开放阅读框编码包括信号肽、b链、c肽和a链的116个氨基酸，其分子量约为12.7ku，理论等电点为5.44。在线分析表明：推测的大口黑鲈前胰岛素原氨基酸序列存在一段跨膜区；并存在信号肽序列，信号肽分裂位点在ala24phe25处。大口黑鲈与其他硬骨鱼类及脊椎动物的前胰岛素原氨基酸序列的比对结果显示，大口黑鲈前胰岛素原a链和b链氨基酸序列均高度保守，与其他硬骨鱼类的前胰岛素原氨基酸序列相似度较高，为75%~94%，但与其他脊椎动物的相似度较低，为59%~62%。用邻接法构建的系统进化树显示，大口黑鲈前胰岛素原与同为鲈形目的岩钝鲈、红甘鲹和尼罗罗非鱼的亲缘关系较近。