基因组步移技术克隆稀有鮈鲫角蛋白18基因序列及序列分析

角蛋白18是角蛋白的一种,属于s型角蛋白,是在哺乳动物和两栖类动物胚胎发育中第一个表达的中间纤维蛋白。根据已发表的人、爪蟾及斑马鱼角蛋白18dna序列,通过dnaman同源性比较获得保守序列，并从中设计二对引物。从稀有鮈鲫基因组中pcr扩增得到2779bp的角蛋白18的dna序列片段；通过基因组步移，分别获得该基因的上游和下游序列片段；最后将获得的全基因片段克隆至质粒载体pmd19t进行序列测定检验。结果显示所克隆的稀有鮈鲫角蛋白18基因全长3765bp。对该基因进行ncbi的blastn同源性比较分析，表明稀有鲫同斑马鱼比较角蛋白18dna序列存在73.6%同源相似性；同时对该基因进行生物学分析，开放阅读框（openreadingframe,orf）预测表明稀有鮈鲫角蛋白18是含有7个外显子和6个内含子,共编码367个氨基酸的蛋白质。