绵羊follistatin基因表达及其结构域的功能分析

为研究羊follistatin基因的功能，提取了绵羊卵巢总rna，通过rt-pcr方法获得羊follistatincdna的完整开放阅读框(1038bp)。去除信号肽序列后与原核表达载体pet41a连接，构建重组表达质粒pfssig?，经大肠杆菌诱导表达获得fssig?蛋白(66kda)。通过rt-pcr克隆了包含n端和结构域1的follistatin突变体(fsn+d1)，将fsn+d1片段插入慢病毒载体(plex-mcs)构建了pfs-n+d1慢病毒重组表达质粒。在293t细胞中进行慢病毒的包装，再感染绵羊肌肉原代细胞，得到稳定表达fsn+d1的肌肉细胞系，通过细胞生长曲线结果显示稳定表达fsn+d1的肌肉细胞明显比正常肌肉细胞增殖快，且差异极显著(p＜0.01)，表明绵羊fsn+d1结构域有促进肌肉细胞生长的功能。