凝乳酶β-转角突变体的构建、表达和性质分析

为了阐明牛凝乳酶的第二个发夹结构中的ⅵ型β-转角的功能，利用基因突变技术，将该转角的氨基酸残基(leu20-gly21-the22-pro23-pro24-gln25)改为(leu20-gly-gly-gln25)、(leu20serglygln25)或(leu20glysergln25),得到3个突变牛凝乳酶原表达质粒pmcgg,pmcsg和pmcgs。除pmcgs不能在大肠杆菌中表达外，pmcgg和pmcsg均能以包含体的形式进行表达，且表达水平与野生型相当。像野生型凝乳酶原一样，pmcgg和pmcsg的表达产物经过变性复性，均能自活化为假凝乳酶，而且复性后的酶原突变体在deaesepharosecl6b上的柱行为与野生型相类似，但突变体假凝乳酶的凝乳及水解酪蛋白活性均明显低于野生型。说明突变对酶原的折叠影响较小，但对酶的催化效率影响较大。