猪vhl基因克隆及敲低克隆胚胎的构建

通过在细胞和胚胎水平对猪vonhippel-lindau(vhl)基因进行了基因敲低研究，以便为建立vhl疾病模型猪奠定基础。研究首先通过3￠race和5￠race克隆得到猪vhl基因cdna全长序列(2725bp)，real-timepcr结果表明vhl基因广泛表达于猪的各种组织器官，其中在肾上腺、肝脏、胰腺、心脏和睾丸等组织器官高量表达。进一步在猪ips细胞中对5条干扰片段进行筛选，获得2条高效的干扰片段，干扰效率分别达到72％(p=0.0012)和64％(p＜0.01)。以稳定干扰vhl基因的猪胎儿成纤维细胞为核供体，构建克隆胚胎，结果表明，克隆胚胎的发育能力与对照组相比没有明显差异，而且在克隆囊胚中vhl基因的干扰效率达到71％(p＜0.01)。综上所述，文中获得了猪vhl基因全长序列并获得该基因稳定敲低的猪细胞和胚胎，从而为vhl疾病模型猪的构建奠定了良好的基础。