融合牛肠激酶轻链ekl包涵体蛋白的复性纯

大肠杆菌高密度发酵表达肠激酶轻链融合蛋白dsba-rekl，主要以包涵体形式存在。包涵体经4mol/l尿素和0.5%tritonx100洗涤，以6mol/l盐酸胍、100mmol/ldtt溶解，在胱氨酸存在下，以脉冲加样方式复性。融合蛋白复性在6mmol/l胱氨酸存在下、脉冲加量0.03mg/ml和复性终蛋白浓度0.3mg/ml为最佳复性方案。复性的融合蛋白加2mmol/lcacl2后快速自切。经idasepharose及qsepharose纯化，rekl纯度可达95%以上，可高效酶切重组瑞特普酶融合蛋白trx-rpa。实现了大规模生产rekl，每升发酵液经复性及纯化后，可得rekl60mg/l以上，使以融合蛋白表达rpa等药用蛋白成为现实。