共表达prrsv修饰的gp5与m蛋白的重组改良型痘苗病毒安卡拉株的构建及其生物学特性

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,prrsv)修饰的orf5(morf5)与orf6基因分别克隆入笔者构建的改良型痘苗病毒安卡拉株(modifiedvacciniavirusankara,mva)转移载体plr-gpt的两个多克隆位点中,构建重组转移载体plr-morf5/orf6。经脂质体介导,将构建好的plr-morf5/orf6转染已感染亲本mva2h的bhk-21细胞单层,用药物选择性培养基(mxhat)在24孔板上进行连续筛选纯化,得到带有筛选标记的重组病毒rmvagpt-mgp5/m。将rmvagpt-mgp5/m感染表达cre重组酶的bhk-21细胞(bhk-cre),获得删除筛选标记的重组病毒rmva-mgp5/m。pcr证明morf5与orf6成功插入mva基因组中;westernblotting与间接免疫荧光证明重组病毒能表达mgp5与m蛋白;重组病毒的生长特性表明与亲本mva出现病变的时间及病毒滴度基本一致。结果表明,本研究成功构建了共表达prrsvmgp5与m蛋白的重组mva,并且表达产物具有免疫原性;外源基因的插入不影响mva复制,具较好的稳定性,从而为prrsv新型基因工程疫苗的研制奠定了良好的基础。