h1n1亚型猪流感病毒的拯救

利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株a/swine/tianjin/01/2004(h1n1)(a/s/tj/04)。将猪流感病毒8个基因节段经rt-pcr合成cdna后,分别克隆到rna聚合酶i/ii双向表达载体phw2000中,构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染cos-1细胞,30h后加入tpck-胰酶至终浓度0.5mg/ml。共转染48小时后收获cos-1细胞及其上清,经尿囊腔接种9日龄spf鸡胚。收获死亡鸡胚尿囊液并继续用spf鸡胚传3代,得到有感染性的病毒。经血凝、血凝抑制验、测序分析、电镜观察等均证实了a/s/tj/04猪流感病毒的成功拯救。这是目前国内首次报道拯救出h1n1亚型猪流感病毒,为进一步研究猪流感病毒基因组结构与功能的关系、流感跨种传播的机制以及构建新型猪流感疫苗株奠定了基础。