克雷伯杆菌甘油脱氢酶基因的克隆表达与纯化

以克雷伯杆菌(klebsiellapneumoniae)基因组dna为模板,运用pcr扩增得到编码甘油脱氢酶(gdh)的基因(glda),并克隆到pmd-18t载体上,构建克隆载体pmd-glda。经测序正确后,将glda亚克隆至表达载体pet-32a(+)上构建表达质粒pet-32glda。在乳糖诱导下,携带pet-32glda的e.colibl21(de3)高效表达分子量约为54kd的可溶性蛋白。表达产物带有his6-tag标记,选用ni柱对表达产物进行纯化,纯化后酶液的比活为188u/mg,纯化倍数和回收率分别为3倍和67.5%。