ctab选择性沉淀和纯化质粒dna工艺的建立

通过直接在大肠杆菌碱裂解上清中加入十六烷基三甲基溴化铵(ctab),优化ctab与质粒dna量的比例、质粒dna选择性释放溶液的选择和tritonx-114的使用,建立了简单、易行的大规模质粒dna纯化工艺。纯化质粒dna的质量检测结果显示,ctab纯化的质粒dna无菌体rna污染,菌体基因组dna、内毒素和蛋白含量分别小于100ng/mg、50eu/mg和10mg/mg质粒dna,od260/od280比值介于1.75~1.85之间,超螺旋质粒dna的比例大于80%,该工艺纯化的质粒dna能达到或接近fda规定的人用质粒dna的各项指标,整个过程不使用动物源性酶和苯酚、氯仿、无水乙醇等有毒或易燃、易爆试剂,成本低廉,工艺环保。