toxr基因作为荧光定量pcr靶基因设计taqman探针快速检测副溶血弧菌

本研究以toxr基因为靶基因,通过优化反应条件建立了快速检测副溶血弧菌的taqman实时荧光pcr方法。特异性试验表明,该方法能选择性检测副溶血弧菌,而与金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特杆菌等多种常见的食源性病原菌没有交叉反应;灵敏度试验表明,该方法最少可检测到25个拷贝的toxr基因重组质粒,对纯培养物和模拟食品样品直接检测的灵敏度分别为21cfu/ml和210cfu/g;重复性试验表明,同一样品于试验内及试验间的变异系数分别为0.9%和1.3%;所制作的标准曲线在2.5×101～2.5×106拷贝数之间有较好的线性关系,能对副溶血弧菌进行准确的定量分析。结果表明,本研究所建立的副溶血弧菌实时荧光pcr检测方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点,能进行定量检测,而且检测时间从核酸抽提到出实验结果仅需要3h,是快速检测副溶血弧菌的有效手段。