重组人碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)融合蛋白的高效表达及鉴定

碱性成纤维细胞生长因子（ｂｆｇｆ）参与了许多细胞生长和分化的调控过程。本文采用重组ｄｎａ技术在大肠杆菌中高效表达了人ｂｆｇｆ。首先将编码人ｂｆｇｆ基因克隆到ｐｘｔ表达载体中与其上游的一短ｓ导肽共一阅读框架，ｂｆｇｆ基因的表达受强的ｔ７启动子调控。采用ｂｌ２１（ｄｅ３）大肠杆菌作为宿主菌，用ｉｐｔｇ诱导ｂｌ２１（ｄｅ３）细菌合成的ｔ７ｒｎａ聚合酶，后者可催化高水平的ｂｆｇｆ基因表达，其ｂｆｇｆ产量可占总菌体蛋白的４２.５％。采用肝素ｓｅｐｈａｒｏｓｅ一步亲和层析法直接从诱导后的细菌裂解产物中得到纯化的重组人ｂｆｇｆ蛋白。经ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析证明该蛋白可被人ｂｆｇｆ特异性单克隆抗体所识别。进一步研究证明该蛋白具有刺激ｎｒ６ｒ－３ｔ３成纤维细胞增殖的生物学活性，并且这一活性可被人ｂｆｇｆ特异性中和抗体所中和。