t7启动子作用下人尿激酶原cdna在大肠杆菌中的高效表达及分离纯化

化学合成的人尿激酶原ｃｄｎａ克隆在表达质粒ｐｅｔ１１ｄ中，在ｔ７启动子的作用下，经０.１ｍｍｏｌ／ｌｉｐｔｇ诱导，在大肠杆菌ｂｌ２１（ｄｅ３）ｐｌｙｓｓ中获得表达。其表达量占菌体总蛋白的１５％，表达产物以无活性的包涵体形式存在。经体外变复性，ｚｎ２＋选择性沉淀，抗体亲和柱层析，及ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ亲和吸附，所表达的人尿激酶原被纯化为单一条带，其比活约１１００００ｉｕ／ｍｇ。