人α防御素5在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化研究

采用pcr扩增大肠杆菌偏好的人α防御素5成熟肽(mhd-5)密码子序列,并将其克隆至pmal-p2x质粒,构建pmal-p2x-mhd-5表达载体,转化大肠杆菌bl21(de3),诱导表达,sds-page分析目的蛋白表达量并优化表达条件。经亲和层析、酶切和离子交换层析等方法分离、纯化重组mhd-5(rmhd-5)多肽。采用浊度法测定rmhd-5对细菌的抑制活性。通过优化表达条件,获得约30%的可溶性目的蛋白表达量,并成功纯化rmhd-5。rmhd-5对大肠杆菌标准菌株(atcc25922)具有较强的抑制活性,在终浓度为62.5mg/ml时,90%以上的细胞被抑制。结果表明采用可溶性融合表达策略,在原核表达系统中诱导表达并纯化具有生物活性的防御素是可行的途径之一。