基因修饰对鸡新城疫病毒f48e9株hn基因dna疫苗表达效力的影响

dna疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系,为了提高目的基因的表达量,本研究对ndvf48e9株的hn基因进行了修饰,对修饰前后hn基因表达水平进行了比较。利用分子生物学软件将ndvf48e9株的hn基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子,同时在hn基因的5′端加上同样已替换密码子的禽流感病毒ha蛋白信号肽序列以期望提高目的蛋白在细胞中的表达。修饰后hn基因命名为soptihn,剔除信号肽的hn基因命名为optihn。将soptihn、optihn和f48e9株的hn基因分别克隆到真核表达载体pvax1和含有多个鸡体内最适免疫刺激序列cpg-odn的载体pvax1-cpg中,将他们分别命名为pv-soptihn、pvc-soptihn、pv-optihn、pvc-optihn和pv-hn、pvc-hn,用这些质粒转染293t细胞,48小时后间接免疫荧光和westernblotting检测细胞中瞬时表达的hn蛋白。结果显示,与未经修饰的hn基因相比,修饰后的hn基因体外瞬时表达水平明显提高,并且密码子优化与添加信号肽序列这两种途径都可以提高hn基因的体外表达量。