人sef基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

构建人sef-l和sef-s基因的复制缺陷型重组腺病毒表达载体,为研究sef的功能和作用机制以及sef的基因治疗奠定基础。通过pcr方法以hsef的表达质粒为模板扩增得到hsef的编码序列,亚克隆到穿梭载体padtrack-cmv中,经测序验证之后,将穿梭载体使用pmei酶切线性化,然后与腺病毒基因组质粒padeasy-1共转化大肠杆菌bj5183,得到重组的ad-hsef-l和ad-hsef-s质粒,最后将ad-hsef-l和ad-hsef-s质粒使用paci线性化,转染到hek293细胞中,包装收获病毒颗粒,免疫印迹实验鉴定表达,荧光素酶报告实验验证其功能。成功构建了人sef基因的复制缺陷型重组腺病毒表达载体,获得了有功能的ad-hsef-l和ad-hsef-s病毒重组子。