编码山羊补体c3d与口蹄疫病毒vp1融合蛋白重组质粒的构建及表达

旨在构建含分子佐剂山羊补体c3d基因的o型口蹄疫病毒vp1基因真核表达质粒。克隆山羊c3d基因,通过linker(g4s)2将3拷贝c3d基因串联;克隆羊源o型口蹄疫病毒vp1基因,通过linker(g4s)2与3拷贝c3d基因相连,构建重组质粒puc19-vp1-c3d3。将vp1-c3d3融合基因亚克隆入含有分泌表达信号肽tpa序列的pcdna3.1(+)cmv启动子下游,构建重组真核表达质粒pcdna3.1-tpa-vp1-c3d3。在脂质体介导下,将pcdna3.1-tpa-vp1-c3d3转染hela细胞。间接免疫荧光分析表明,vp1-c3d3在hela细胞中获得了瞬时表达,westernblot分析证实转染的阳性细胞能分泌预期大小(133kd)的融合蛋白。重组质粒pcdna3.1-tpa-vp1-c3d3为研制以羊补体c3d为分子佐剂的口蹄疫新型疫苗奠定了基础。