鹅il-2基因在大肠杆菌中的表达及其可溶性单体的分离

将去除信号肽编码序列的鹅il-2基因克隆到原核表达载体pet-28a(+),构建了重组表达质粒pet-28a(+)-goil-2,转化大肠杆菌bl21(de3)感受态细胞,经iptg诱导,实现了重组鹅il-2(rgoil-2)蛋白在大肠杆菌中的表达。sds-page和western-blotting分析显示,表达蛋白的分子量约为15.0kd,能被抗鹅il-2单克隆抗体特异识别。可溶性分析表明表达蛋白大部分以包涵体形式存在,部分以可溶形式存在,非变性电泳可见可溶性蛋白存在单体和多聚体组分。镍柱亲和层析法纯化的rgoil-2蛋白过滤后,利用?ktafplc(快速蛋白分离纯化系统)进行逐级分离,非变性电泳可见单一的鹅il-2可溶性蛋白单体。体外生物学活性分析显示鹅il-2可溶性蛋白单体能刺激鹅淋巴细胞增殖。这为进一步研究鹅il-2的生物学功能及其临床应用奠定基础。