gl-7aca酰化酶表达检测系统的建立

戊二酰7氨基头孢烷酸(gl-7aca)酰化酶能够催化gl-7aca分解生成7-aca,后者是工业半合成生产头孢类抗菌素所需的重要前体。为了准确地检测gl-7aca酰化酶及其突变体的表达,本研究通过构建一系列质粒载体,建立了两个简便有效地测定gl-7aca酰化酶基因acy表达量的系统,从而可对酶的比活力进行定量。我们将两个报告基因,即儿茶酚双加氧酶基因(xyle)和β-半乳糖苷酶基因(lacz)分别置于acy基因的下游,使之与acy基因共用一个启动子,进行串联表达,各自构成一个多顺反子系统。实验证明,基因融合后的儿茶酚双加氧酶或β-半乳糖苷酶的活力可以间接反映acy的表达量。