甲型h5n1流感病毒m2与ha双基因载体疫苗在小鼠体内的免疫学评价

高致病性h5n1亚型禽流感病毒(aiv)严重威胁到人类健康，因此研制高效、安全的禽流感疫苗具有重要意义。以我国分离的首株人h5n1亚型禽流感病毒(a/anhui/1/2005)作为研究对象，pcr扩增基质蛋白2(m2)和血凝素(ha)基因全长开放阅读框片段，构建共表达h5n1亚型aiv膜蛋白基因m2和ha的重组质粒pstar-m2/ha。此外，还通过同源重组以293细胞包装出表达m2基因的重组腺病毒ad-m2以及表达ha基因的重组腺病毒ad-ha。用间接免疫荧光(ifa)方法检测到了各载体上插入基因的表达。按初免-加强程序分别用重组质粒pstar-m2/ha和重组腺病毒ad-ha+ad-m2免疫balb/c小鼠，共免疫4次，每次间隔14d。第1、3次用dna疫苗，第2、4次用重组腺病毒载体疫苗，每次免疫前及末次免疫后14d采集血清用于检测体液免疫应答，末次免疫后14d采集脾淋巴细胞用于检测细胞免疫应答。血凝抑制(hi)实验检测到免疫后小鼠血清中的hi活性。elisa实验检测到免疫后小鼠血清中抗h5n1亚型流感病毒表面蛋白的igg抗体。elispot实验检测到免疫后小鼠针对m2蛋白和ha蛋白的特异性细胞免疫应答。流感病毒m2与ha双基因共免疫的研究，为研究开发新型重组流感疫苗奠定了基础。