重叠延伸pcr克隆三孢布拉霉carra基因及其功能活性检测系统的构建

三孢布拉氏霉菌carra蛋白，既有番茄红素环化酶功能活性又有八氢番茄红素合成酶功能活性，为了对carra蛋白进行双功能活性分析，及探测carra蛋白的番茄红素环化酶功能活性位点，构建了在大肠杆菌体内通过颜色互补检测两种酶活性的系统。通过重叠延伸pcr的方法克隆得到了carra基因，并构建原核表达载体pet28a-carra，与携带crti/crtb/crte基因簇的质粒pac-lyc共转化bl21(de3)，验证番茄红素环化酶功能活性；与以pac-lyc为基础构建的携带crti/crte基因簇的质粒pac