二硫键形成促进双载体转断裂b区缺失型凝血因子ⅷ基因

双载体共转b区缺失型凝血因子ⅷ(bdd-fⅷ)重链和轻链基因是克服腺相关病毒载体(aav)容量限制的一种策略，但重链分泌的低效性产生链不均衡性，影响转基因的功效．假设重、轻链链间二硫键形成可提高双载体转bdd-fⅷ基因的功效，本文将bdd-fⅷ的重链a2区的met662和轻链a3区的asp1828突变为cys．双载体培养的cos-7细胞共转染突变重链和轻链基因，westernblot显示细胞内二硫键交联的重、轻链蛋白形成，elisa和coatest分析细胞培养上清的bdd-fⅷ重链分泌量和生物活性，分别为(109±13)μg/l和(0.65±0.12)u/ml，明显高于共转野生型重链和轻链基因细胞((71±11)μg/l和(0.35±0.05)u/ml)．结果表明，链间二硫键形成可提高双载体转bdd-fⅷ基因的功效，为进一步动物体内运用双aav载体转bdd-fⅷ基因提供了实验依据．