柔嫩艾美耳球虫重组鸡痘病毒的构建与免疫保护研究

以鸡柔嫩艾美耳球虫(e.tenella)杂交株f2的rna为模板，应用反转录聚合酶链式反应(rt-pcr)技术扩增了杂交株f2的rhomboid蛋白家族相关基因，将pcr产物克隆至pmd18-t载体中，构建出克隆质粒pmd-rhomboid.以kpnⅰ、pstⅰ双酶切重组质粒pmd-rhomboid和鸡痘病毒载体质粒puta2，并将纯化的rhomboid基因亚克隆至鸡痘病毒载体puta2复合启动子下游，构建出真核表达重组质粒puta-rhomboid.采用脂质体转染技术，将该质粒转染fpv282e4株感染的鸡胚成纤维细胞(cef)中，通过brdu药物加压筛选，并通过rt-pcr和蛋白质印迹等方法检测，筛选出一株球虫鸡痘重组病毒rfpv-rhomboid.进一步经cef扩增病毒后，免疫雏鸡，监测免疫指标.结果表明：重组病毒接种鸡外周血中的cd4+、cd8+含量显著高于非免疫对照组(p<0.05)；与对照组相比，重组病毒对鸡的增重效果差异显著(p<0.05)，对e.tenella的攻击具有一定的保护作用，显示出较好的应用前景.