牛蛙两个新temporins基因的克隆及其抗菌机制的研究

temporins是从蛙属中得到的一类羧基端酰胺化的疏水性抗菌肽，具有抗细菌、霉菌、酵母菌、原虫及病毒活性．为了研究牛蛙皮肤抗菌肽的多样性及其结构特点，根据genbank数据库中蛙属抗菌肽基因信号肽序列设计简并引物，从牛蛙皮肤cdna文库中克隆到两个新的temporins家族抗菌肽，命名为temporin-la(llrhvvkilekylamide)和temporin-lb(lfrhvvkifekylamide)．合成的temporin-la和temporin-lb肽具有很强的抗菌活性，尤其是对革兰氏阳性细菌．溶血性测定结果表明，temporin-la浓度高至250mg/l时对兔红细胞仍无溶血活性，而temporin-lb具有较弱的溶血活性(半数致死浓度lc50≈230μmol/l)．通过透射电镜观察temporin-la和temporin-lb处理过的金黄色葡萄球菌的细胞结构，发现它们都能直接地杀死细菌，但作用机制不一样．