一种基于gfp分子荧光显示的检测大尺度染色质松弛技术的建立

在真核生物中，基因组dna是被高度包装成染色质的形式而存在的，这就对基因在复制、转录、修复、重组时的功能分子有效地接近dna形成了天然屏障，执行上述生化反应需要松散染色质的结构，染色质松散是染色质动态变化即染色质重塑(chromatinremodeling)的一种形式．越来越多的证据表明，染色质重塑在dna损伤反应中起着非常重要的作用，染色质重塑过程可以把损伤应答和修复蛋白募集到损伤位点，从而完成修复．为了进一步探讨染色质重塑和dna损伤修复的偶联机制，采用了基于lac抑制子和lac操纵子的大规模染色质重塑报告系统，并借助gfp分子荧光显示方法，建立了可以直观地观察染色质松散的技术．在利用该技术证实了dna损伤应答蛋白tip60能够强烈诱导染色质松散的基础上，发现p53诱导基因3蛋白(pig3)在细胞辐射dna损伤反应中也能够一定程度地诱导染色质松弛．这些结果证明此技术是可靠的，也为阐述dna损伤修复与染色质重塑关联机制提供了新的信息．