8-异戊烯基柑橘素促进体外培养成骨细胞成熟矿化的研究

研究8-异戊烯基柑橘素对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(ratskullosteoblasts，rob)的分化成熟及生物矿化的影响．取新生大鼠颅骨多次酶消化法得到成骨细胞，培养于含10%fbs的mem培养液中，3天后首次换液，待细胞铺满皿底传代培养．以碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，alp)为检测指标，96孔板梯度筛选作用最佳浓度，在最佳浓度作用并成骨性诱导培养的第3、6、9、12天测alp活性、钙盐沉积量；第12天进行alp和钙化结节组织化学染色及计数；成骨性诱导后不同时间点提取totalrna，rtreal-timepcr法检测成纤维细胞生长因子(bfgf)、胰岛素样生长因子-1(igf-1)、成骨相关转录因子osterix、runx-2和骨形态发生蛋白-2(bmp-2)的基因表达情况；成骨性诱导的第4、8、12天裂解获得细胞总蛋白，蛋白质印迹法检测人ⅰ型胶原蛋白(col-ⅰ)的蛋白质表达量．研究结果表明：1×10-6mol/l能显著促进成骨细胞的成熟分化，表现为提高rob的alp活性、促进钙盐沉积、增加钙化结节数量；提高bfgf、igf-1、osterix、runx-2和bmp-2mrna表达水平；促进col-ⅰ的合成．由此可知终浓度为1×10-6mol/l8-异戊烯基柑橘素能显著促进rob的分化成熟及生物矿化，证明8-异戊烯基柑橘素能促进成骨细胞的分化成熟及生物矿化，作为促进骨修复和抗骨质疏松的有效成分具有较大的药用价值．