用于库-库筛选体系的抗原表达载体的构建

选择感染性噬菌体(sip)技术是研究蛋白质相互作用的良好手段，体内sip技术在理论上适于库-库筛选，而双载体共包装聚合噬菌体方式是一条有效途径.为构建适合库-库筛选的抗原表达载体，选用tg10载体作为基本载体进行改造，首先克隆噬菌体m13基因间隔区的序列插入tg10中得到质粒ptmi，克隆基因ⅲ的n1n2区序列，并在其3′端加上一段g4t柔性多肽，将nin2插入到ptmi载体中lac启动子的下游得到ptmin，化学合成ptrc启动子序列替换ptmin中的lac启动子及部分功能基因序列，构建成抗原表达载体pttmin，化学合成c-myc的十肽表位插入到g4s后进行融合表达，采用elisa和sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测抗原的表达，结果显示抗原得到了融合表达.用抗体呈现载体对pttmin性能进行鉴定，结果表明抗原表达载体可以与抗体呈现载体高效的共包装.综合以上结果说明抗原表达载体构建成功，可望用于库-库筛选体系.